如何確保人外周血淋巴細胞分離液分離效果的穩定性?
要確保人外周血淋巴細胞分離液分離效果的穩定性,可從以下幾個方面著手:
1、分離液的選擇與保存
選擇品質好的產品:選擇知名品牌、質量穩定的分離液,其成分和密度越精準,批次間差異小。
正確保存條件:嚴格按照分離液的保存要求存放,通常為 4 - 8℃,避免冷凍或高溫。定期檢查保存設備的溫度穩定性,避免因溫度波動影響分離液性能。
2、樣本的采集與處理
規范采血操作:使用無菌、無熱原的采血器材,采集新鮮外周血。采血過程要避免溶血,盡量減少組織液混入,控制好采血量與抗凝劑的比例,一般為 9:1。
及時處理樣本:血液采集后應盡快進行分離操作,一般不超過 4 小時。如不能及時處理,需將樣本保存在 4 - 8℃,但保存時間也不宜過長,以免細胞活性和密度發生改變。
3、實驗操作的規范
準確加樣:將血液樣本緩慢、均勻地加在分離液上方,形成清晰的分層界面,避免血液與分離液混合。加樣量要根據分離液的規格和實驗要求準確控制。
合適的離心條件:嚴格按照分離液說明書的要求設置離心轉速和時間。離心溫度也應保持穩定,一般為室溫或 4℃。離心過程中避免中途停止或晃動離心機,確保離心效果的一致性。
4、質量控制與監測
定期校準設備:對離心機、移液器等實驗設備定期進行校準和維護,確保其性能穩定。定期檢查離心機的轉速準確性和溫度控制精度,移液器的吸液準確性和重復性。
進行質量監測:每次分離后,可通過顯微鏡觀察細胞形態和純度,或采用流式細胞術等方法檢測淋巴細胞的回收率和純度。如發現分離效果異常,及時查找原因并進行調整。
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